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鼠源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒检测样品RNA的抽提方法

2023-03-15
鼠源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒检测样品RNA的抽提方法:

①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。

②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。

③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。

④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其完全溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
甲巯咪唑 英文名称: Methimazole CAS号: 60-56-0 分子式: 114.17 分子量:
苯丙酸诺龙 英文名称: Nandrolone phenylpropionate CAS号: 62-90-8 分子式: 406.56 分子量:
二苯基-(2-氯苯基)甲醇 英文名称: Two phenyl - (2-) methanol CAS号: dfhh 分子式: 分子量:
醋酸氟轻松 英文名称: Fluoride acetate CAS号: 356-12-7 分子式: 494.52 分子量:
丙酸睾丸素 英文名称: Testosterone propionate CAS号: 57-85-2 分子式: 344.49 分子量:
紫杉醇 英文名称: Taxol CAS号: 33069-62-4 分子式: 853.91 分子量:
紫丁香苷 英文名称: Purple Lilac CAS号: 118-34-3 分子式: 372.37 分子量:
紫草酸 英文名称: Purple oxalic acid CAS号: 28831-65-4 分子式: 538.46 分子量:
紫草素 英文名称: Shikonin CAS号: 517-89-5 分子式: 288.3 分子量:
梓醇 英文名称: Catalpol CAS号: 2415-24-9 分子式: 362.33 分子量:
猪去氧胆酸 英文名称: Hyodeoxycholic Acid CAS号: 83-49-8 分子式: 392.57 分子量:
栀子甙 英文名称: Gardenia CAS号: 24512-63-8 分子式: 388.37 分子量:
芝麻素 英文名称: Sesame seed CAS号: 607-80-7 分子式: 354.35 分子量: