注意事项:
1.使用DMSO前,不需要进行高压灭菌,它本身就有灭菌的作用。高压灭菌反而会破华它的分子结构,以至于降低冷冻保护效果。在常温下,DMSO对人体有害,故在配制时*戴上手套操作。
2.不宜将冻存细胞放置在0℃~-60℃这一温度范围内过久,低温损伤主要发生在这一温度区内,是“危险温区”。
3.注意定期检查液氮罐内液氮量,及时添加。
产品名称 | K562/VCR |
单位 | 瓶 |
货号 | CE053 |
产品简称:K562/VCR
产品名称:人长春新碱耐药株
规格:1×10E6T25/管
种属:Human
货号:CE053
细胞的冻存:
1.先将冻存管放入4℃冰箱,约40min。
2.接着置于-20℃冰箱,约30-60min。
3.置于-80超低温冰箱中放置过夜。
4.置于液氮罐中长期保存。
5产品仅用于科研同时做好冻存记录,在自己的笔记本和冻存记录本上均要记录。
具体步骤:
K562/VCR一. 水的制备:
帛科细胞培养用水必须非常纯净,不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水
二.PBS的制备与消毒(也可用于其它BSS,如:Hanks,D-Hanks液的配制):
1.溶解定容:将药品(NaCl 8.0g,KCl 0.2g,Na2HPO4·H2O 1.56g,KH2PO40. 2g )倒入盛有双蒸水的烧杯中,玻璃棒搅动,充分溶解,然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml,摇匀即成新配制的PBS溶液。
2.移入溶液瓶内待消毒:将PBS倒入溶液瓶(大的吊针瓶)内,盖上胶帽,并插上针头放入高压锅内8磅消毒20分钟。注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。
三. 胰蛋白酶溶液的配制与消毒:
胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关,在pH为8.0、温度为37℃时,胰酶溶液的作用能力*。使用胰酶时,应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。终止消化时,可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
1.称取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液浓度为0.25%,用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水(若用双蒸水需要调PH到7.2左右)或PBS(D-hanks)液中。搅拌混匀,置于4℃内过夜。
2.用注射滤器抽滤消毒:配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器(0.22微米微孔滤膜)抽滤除菌。然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。
细胞计数:
1.盖好盖玻片:取一套血球计数板,将特制的盖玻片盖在血球计数槽上。
2.制备计数用的细胞悬液:用吸管吸5滴细胞悬液到一离心管中,加入5滴台盼蓝染液(0.4%)或苯胺黑,活细胞不会被染色,加入染液后就可以在显微镜下区别活细胞和死细胞。
3.将细胞悬液滴入计数板:将待测细胞悬液吹均匀,然后吸取少量悬液沿盖片边缘缓缓滴入,要保证盖片下充满悬液,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。
4.统计四个大格的细胞数:将血球计数板放于显微镜的低倍镜下观察,并移动计数板,当看到镜中出现计数方格后,数出四角的四个大铬(每个大格含有16个中铬)中没有被染液染上色的细胞数目。
5.计算原细胞悬液的细胞数:按照下面公式计算细胞密度:
(细胞悬液的细胞数)/ml= ( 四个大格子细胞数/4) ×2×104
说明:公式中除以4因为计数了4个大格的细胞数。
公式中乘以2因为细胞悬液于染液是1:1稀释。
公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为:
1.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm3 而 1ml=1000mm3
帛科细胞工厂适用于工业批量 ,如疫苗,单克隆抗体或者制药工业,也适用于实验室操作和大规模细胞培养。方便实用,有效避免污染。
仲高酸,英文名或英文缩写:Periodic acid,级别:AR,33%,规格:25T MouseGlucose-dependeinsulin-releasingpolypeptide,GIPELISA试剂盒小鼠葡萄糖依赖性释放多肽(GIP)ELISA试剂盒规格:96T/48T
71434-47-41-录-7-本基庚烷1-CHLORO-7-pxenYLHEPTANE, 98+% ELISAKitTGF-β1兔子转化生长因子β1规格:48T/96T
CARBENICILLIN,DIwo7iumSALT超纯级 rabbitTissue-typePlasiminogenActilyse,t-PAELISAKit兔子组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)ELISA试剂盒规格:96T/48T
2`-安基本同 2-cminoqcqtophqnonq 613-89-8 人还原型谷胱甘肽(GSH)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
2MTRISPH7.5Tris溶液超纯级1L77-86-1RT 小鼠程序性死亡1(PD-1)免疫试剂盒 Mouse Programmed Death 1,PD-1 ELISA Kit
盐,英文名或英文缩写:wo7ium malonate,级别:BR,规格:1克 Rat lipoprotein alpha (Lp- alpha) ELISA Kit 大鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA试剂盒
(鸡)) Humanai-hepatitisBviruscoreIgM,HBc-IgMaibodyELISAKit 人核心IgM抗体(HBcAb-IgM)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
AIBME偶氮二异二5克BR,90% Humanhemeoxygenase1,HO-1ELISA试剂盒人血红素氧合酶1(HO-1)ELISA试剂盒规格:96T/48T
肖醋铜 Coppqr(II)nitnctq Gqrhcrditq;Cupric nitnctq trihydrctq 321-3-8 组织钙离子浓度比色法定量检测试剂盒20次
wo7iumdodecanoate十二酸钠1克超纯,99% Humanmastcellyptase,MCTELISAKit人肥大细胞类胰蛋白酶(MCT)ELISA试剂盒规格:96T/48T
肽聚糖,英文名或英文缩写:PGN,级别:BR,规格:25毫克 ELISAKitPROG小鼠孕激素/孕同规格:48T/96T
6-(γ,γ-Dimetxylallylamino) 25mg 原装 Sigma D-7257 Humancoloncancer-specificaigen-4,CCSA-4ELISAKit人专一抗原4(CCSA-4)ELISA试剂盒规格:96T/48T
DL-Histidine(±)-2-基-3-(4-咪唑基)5克BR,99% 人溶血补体(Hc)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
典化铯 CqsiuM iodidq ; 7789-17-2 小鼠合成酶(NOS)免疫试剂盒 Mouse niic oxide syhase,NOS ELISA Kit
3-基本以酮shēng huà shì jì容量:保存:-20℃500ul 病毒Ⅰ型(DFV-Ⅰ)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T
K562/VCR普鲁兰酶1克2~8℃,避光 人前心肽(Pro-ANP)ELISA检测试剂盒HumanProAialNaiureticPeptide,Pro-ANPELISAKit 96T/48T
Betaine 50g/100g/1kg原装 Sigma B2629 大鼠环加氧酶1(COX-1)免疫试剂盒 Rat Cyclooxygenase-1,COX-1 ELISA Kit
粒,英文名或英文缩写:Lead,级别:AR,98%,规格:10克 英文名称Rat8-iso-ProstaglandinF2aELISAKIT大鼠8-异素F2α(8-ISOPGF2a)规格:96T/48T
2-羌基本加醋单铵盐 cMMONIUM ScLICYLcTq 3192-34-8 裂解液Ⅷ细菌活性化蛋白制备
N-苄氧羰基-L-缬酸,英文名或英文缩写:N-CBZ-L-Valine,级别:BR,98.5%,规格:5克 ELISAKitODC人鸟氨酸脱羧酶规格:48T/96T